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“九·一八事变”后，南京爱国学生的救亡运动迅速高涨。9月22日，中大礼堂门口车水马龙，冠盖云集，蒋介石、戴季陶、朱家骅等国民党中央委员来此开会。学生们闻讯后，聚集在大礼堂门前，要求蒋介石出见请愿学生。过了好久，蒋介石才从大礼堂内走出来，立在大礼堂门口台阶上和学生见面，并针对“九·一八事变”，说了诸如中央已有最后决心，保存民族生存，宁为玉碎，共赴国难之内冠冕堂皇的话。9月22日下午，中大学生在大礼堂成立了中大学生抗日救国会。

1935年12月，北平学生为要求抗日、免遭亡国奴命运，抗议国民政府的卖国行径，于9日、16日连续两次游行示威，遭到当局的镇压。12月17日晚7时，在中大礼堂召开了南京大中学校学生代表大会，到会学生代表两千余人。会议决定于18日午后1时，举行南京大中学生联合大请愿，要求国民党当局“惩办华北任意摧残学生运动之官吏”、“开放言论”、“反对华北自治”、“释放北平被捕同学”等。

1937年，日军占领南京后，民国最高学府国立中央大学被日军用作陆军医院，学校大门口悬挂上写有“ひゃぅどぅぶだぃ”的日文招牌，大礼堂顶部被涂抹上巨大的白底红十字，教室内放满了日式榻榻米病床。学校大门口有日军警卫站岗。普日莘莘学子求学之地，沦落为侵略军治病疗伤之所。

抗战胜利后，国立中央大学校舍基本没有遭到破坏，只是校舍内的办公、教学用具荡然无存。1946年，学校师生回校复课。南京解放后，国立中央大学改名为国立南京大学：1952年院系调整时，更名为南京工学院。1989年，恢复东南大学旧名。

1991年，国立中央大学建筑群被国家建设部、国家文物局评为近代优秀建筑，1992年又被列为南京市文物保护单位。2006年，国立中央大学旧址被国务院列为全国重点文物保护单位。